为了检验F3区域的RNA二级结构是否对F3 RNA的包装发挥重要作用，作者在通过密码子优化策略改变了F3 RNA的核苷酸序列，确保了在不改变其氨基酸序列的前提下，对F3 RNA的RNA二级结构进行改变。作者首先生成了两种不同的F3 RNA变体(图4A)，即携带大肠杆菌密码子优化的F3区域的F3-opt1和携带牛密码子优化的F3区域的F3-opt2。然后球盟会，为了进一步确定负责有效包装F3 RNA的特定区域球盟会，作者生成了另外三个嵌合变体，即F3-opt-chimera-1、F3-opt chimera-2和F3-opt-chimera-3，每个嵌合变体都携带来自F3和F3-opt1的嵌合F3序列（图4C）。所有这些变体都具有与F3 RNA相同的核苷酸长度。随后使用srSARS-CoV-2作为辅助病毒，检测了这些F3 rna衍生变体的包装能力。转染细胞的细胞内rna的Northern blot分析显示，所有F3 rna衍生的变体在辅助病毒srSARS-CoV-2存在下都能有效复制(图4B)。然而，所有F3 RNA衍生变体在p0感染细胞中的积累量远低于F3 RNA，这表明这些变体没有有效地包装成srSARS-CoV-2颗粒。此外，数据还表明，完整的1.4 kb的F3序列对于有效地将SARS-CoV-2 RNA包装到病毒颗粒中十分重要。球盟会
总的来说，本研究的结果有助于阐明SARS-CoV-2 RNA包装的机制，并有助于开发针对严重SARS-CoV-2及其他相关冠状病毒的靶向治疗方法印刷。